Герман Н.В., Владимцева И.В.
ВЫДЕЛЕНИЕ И ИЗУЧЕНИЕ СВОЙСТВ БАКТЕРИАЛЬНОГО ШТАММА, ОСУЩЕСТВЛЯЮЩЕГО ОЧИСТКУ СТОЧНЫХ ВОД КОЖЕВЕННОГО ПРОИЗВОДСТВА
Волгоградский Государственный Технический Университет
Из сточных вод кожевенного производства выделен бактериальный штамм. Изучены его культуральные, морфологические и биохимические свойства, которые позволили отнести его к роду Bacillus.
Ключевые слова: биологическая очистка, бактериальные штаммы, идентификация микроорганизмов.
From wastewater tannery isolated bacterial strain. Examine its cultural, morphological and biochemical properties, which allowed us to refer it to the genus Bacillus.
Keywords: biological cleaning, bacterial strains, identification of microorganisms.
Сточные воды кожевенных производств содержат органические вещества природного происхождения, которые могут быть использованы микроорганизмами в качестве источников питания, поэтому основным методом их очистки является биологический.
Целью данной работы было выделение и изучение свойств микроорганизмов, осуществляющих очистку сточных вод кожевенного производства.
Материал для исследования забирали из коллектора отстойника сточных вод Волгоградского кожевенного завода. Выделение микроорганизмов производили на экспериментальной селективной среде, содержащей кожную мздру (20%) и минеральные соли (г/л): NH4Cl – 0,625; CaCl2 – 0,0025; MnCl2 – 0,005; MgSO4 – 0,05; FеSO4 – 0,0025; NaCl – 1,25; Na2HPO4 – 2,5; KH2PO4 – 0,25.
Полученную смесь кипятили в течении 1 мин, постоянно перемешивая и стерилизовали автоклавированием при 1 атм в течение 15 мин.
Выделение микроорганизмов осуществляли следующим образом. Пробы сточной воды десятикратно раститровывали в 5 мл 0,89% NaCl и высевали в объеме 0,1 мл на селективную среду. Посевы инкубировали в течение 24 ч при 37°C и 48 ч при комнатной температуре (18°C), после чего проводили визуальный анализ выросших колоний. Клоны отсевали на скошенный агар для получения чистых культур.
Культурные свойства выделенных штаммов оценивали, анализируя внешний вид изолированных колоний (поверхность, размер, цвет, характер края, наличие складчатости и т.п.). Морфологические свойства определяли по результатам окраски по Грамму и микроскопирования в проходящем свете оптического микроскопа МЛ-1 (ЛОМО, г.Санкт-Петербург). Анализ вышеперечисленных свойств позволил выявить 11 штаммов, отличающихся по культурным и морфологическим свойствам.
На следующем этапе исследований определяли скорость роста выделенных культур в полусинтетической жидкой питательной среде. Посев культур производили в объеме 0,1 мл с концентрацией 109 м.к./мл в пробирки с 3мл среды, содержащей отходы кожевенного производства и минеральные компоненты. Посевы инкубировали в течение 18 ч при температуре 37°C. Интенсивность роста и накопления биомассы микроорганизмов оценивали фотоколориметрическим методом на приборе КФК-2-УХЛ-4.2. при длине волны светофильтра 670 нм в кюветах с длиной оптического пути 5,065 мм.
В результате экспериментальной работы был отобран один бактериальный штамм, дающий наибольшее количество биомассы. На плотной питательной среде штамм формировал колонии молочно-белого цвета, поверхность сухая, шероховатая, край неровный, размер 4-7 мм. Морфологические свойства штамма: грамположительные палочки с закругленными концами, образует споры. При окраске спор по Ожешко выявлено их субтерминальное расположение. Исследование биохимических свойств показало, что выделенные микроорганизмы являются облигатными аэробами, оксидазаотрицательны, уриазаотрицательны, на желточно-солевой среде Чистовича растут без изменения питательной среды. На кровяном агаре проявляют гемолитическую активность.
Морфологические, культуральные и биохимические свойства выделенных микроорганизмов позволили отнести их к семейству Bacillaceae, роду Bacillus.
Таким образом, в результате проведенной экспериментальной работы из сточных вод кожевенного завода г. Волгограда был выделен и частично идентифицирован бактериальный штамм, проявляющий наибольшую скорость роста на селективной питательной среде. Выделенный штамм был обозначен нами как Bacillus sp. ТУ5. Штамм перспективен для дальнейших исследований с целью конструирования бактериального препарата, интенсифицирующего биологическую очистку сточных вод кожевенных производств.